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ELISA試劑盒間接法測抗體
編輯: ELISA試劑盒       時(shí)間: 2012-09-20       http:// www.d6t98.cn

ELISA試劑盒間接法測抗體

    ELISA試劑盒間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用海袪記的抗抗體,抗人免疫球蛋白抗體,以檢測巳與固相杭原結(jié)合的受拾抗體,故稱為間接法、操作步驟如下:
    1.將特異性抗原與固相栽體聯(lián)結(jié),形成鬧相抗原。洗除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
    2.加稀釋的受檢血清,保溫反應(yīng)。血清中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,血清中的其他成份在洗滌過程由被洗去。
    3.加酶標(biāo)抗抗體。可用酶標(biāo)抗人lg以檢測總抗體,一般多用酶標(biāo)抗人igg檢測抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗抗體結(jié)合,從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,固相載體上的酶景與標(biāo)本中受檢抗體的量正相關(guān)。
    4.加底物顯色。
    ELISA試劑盒的本法主要用于對病原體抗體的檢測而進(jìn)行傳染病的診斷。ELISA試劑盒間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原,就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測相應(yīng)抗體的方法。
    ELISA試劑盒間接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度。雖然有時(shí)用粗提杭原包被也能取得實(shí)際有效的結(jié)果,但應(yīng)盡可能予以純化,以提髙試驗(yàn)的特異性。特別應(yīng)注憊除去能與一般健康人血清發(fā)生反應(yīng)的雜質(zhì),例如以ecoli為工程菌的重組抗原,如其中含有ecoli成份,很可能與受過e.coli感染者血淸中的抗e.coli抗體發(fā)生反應(yīng)。抗原中也不能含有與酶標(biāo)抗人lg反應(yīng)的物質(zhì),例如來自人血漿或人體組織的抗原,如不將其中的去除,試驗(yàn)中也將發(fā)生假陽性反應(yīng)。另外如抗原中含有無關(guān)蛋白,也會因競爭吸附而影響包被效果。
    文章來自:ELISA試劑盒 免疫組化筆Pap Pen http://www.d6t98.cn/

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