peprotech細(xì)胞因子注意事項(xiàng)
目前檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞特定細(xì)胞因子的表達(dá)手段包括：ELIspot、原位雜交、免疫細(xì)胞化學(xué)、限制性稀釋分析(limiting dilution analysis，LDA)和單細(xì)胞PCR，應(yīng)用原位雜交技術(shù)和免疫組化方法觀察細(xì)胞因子蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá)可以識(shí)別Th1和Th2細(xì)胞，此方法可獲得較強(qiáng)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)，但此方法工作量大、主觀性強(qiáng)，難以進(jìn)行大樣本檢測(cè)，且人肉眼識(shí)別能力有很大的局限性，而ELISPOT及單細(xì)胞PCR技術(shù)，技術(shù)性強(qiáng)、勞動(dòng)強(qiáng)度大，難以進(jìn)行廣泛推廣。隨著多標(biāo)記及胞內(nèi)細(xì)胞因子標(biāo)記流式細(xì)胞技術(shù)的出現(xiàn)，使對(duì)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的研究推向了一個(gè)新的階段。下面主要對(duì)胞內(nèi)細(xì)胞因子流式細(xì)胞技術(shù)作以介紹。
早期細(xì)胞因子表達(dá)與細(xì)胞功能相關(guān)性研究是基于特定克隆">克隆細(xì)胞的激活。盡管研究應(yīng)用T淋巴細(xì)胞克隆">)與TH2(IL－4，IL－5，IL－10)，但這些研究很難外推，因?yàn)門細(xì)胞克隆"g克隆證明了不同細(xì)胞因子的合成，如TH1(IL－2，IFN－>克隆與體內(nèi)T細(xì)胞功能相關(guān)性還未被揭示。
近來(lái)，Jung與Picker采用了monensin、PMA等藥物預(yù)孵，用Brefeldin(BFA)、Monensin阻斷了胞內(nèi)高爾基體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)的方法使得細(xì)胞因子聚集，蓄積，增強(qiáng)細(xì)胞因子信號(hào)可被流式細(xì)胞儀檢測(cè)。因?yàn)樽匀粻顟B(tài)下，T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生少量的細(xì)胞因子，通常要對(duì)T淋巴細(xì)胞體外活化進(jìn)行研究。在體外刺激過(guò)程中，T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子已釋放出來(lái)，胞內(nèi)細(xì)胞因子信號(hào)較弱，難以進(jìn)行檢測(cè)。這一方法可檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞內(nèi)多個(gè)細(xì)胞因子，并可區(qū)分表達(dá)特定細(xì)胞因子的細(xì)胞亞群。在細(xì)胞水平該方法證明了人與鼠的淋巴細(xì)胞都存在1型與2型分化，且這些分化在特定細(xì)胞因子增強(qiáng)時(shí)可被逆轉(zhuǎn)。且這些研究清楚地證明，只有激活的細(xì)胞亞群可以表達(dá)細(xì)胞因子，靜止的正常淋巴細(xì)胞(T、B、NK)不能分泌細(xì)胞因子。
胞內(nèi)流式分析法是用抗細(xì)胞因子抗體與細(xì)胞表面或胞內(nèi)特定亞群標(biāo)志組合，即可檢測(cè)不同細(xì)胞亞群細(xì)胞因子的分泌，同時(shí)采用特殊的化學(xué)與抗體選擇，確保靜止與無(wú)細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的最小熒光背景。具有其它方法難以比擬的優(yōu)點(diǎn)：
快速：流式定量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子可在一天內(nèi)完成，實(shí)驗(yàn)流程需6-8小時(shí)，實(shí)際操作時(shí)間為1-2小時(shí)，快速簡(jiǎn)便；
簡(jiǎn)便：無(wú)需組織培養(yǎng)，可以全血分析，無(wú)需分離PBMCs；
靈敏度高：高度靈敏的熒光標(biāo)記與檢測(cè)系統(tǒng)；
高效：可以在同一個(gè)細(xì)胞內(nèi)同時(shí)檢測(cè)兩種或更多種細(xì)胞因子，也可根據(jù)細(xì)胞免疫表型區(qū)分分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞的亞型，進(jìn)行多參數(shù)相關(guān)分析；
安全：減少樣本處理與生物源性污染
接近生物體的分析條件：全血檢測(cè)保留細(xì)胞及生化微環(huán)境更準(zhǔn)確反映了體內(nèi)狀況
