peprotech細胞因子所需試劑
1、細胞表面染色的熒光標記的單抗試劑
依據(jù)實驗需要選擇特殊表面標志
CD45圈定所有淋巴細胞
CD3 圈定T淋巴細胞
CD4 圈定T輔助淋巴細胞亞群
CD8 圈定T抑制淋巴細胞亞群
CD19/或CD20圈定B淋巴細胞
CD56圈定NK淋巴細胞
CD14圈定單核細胞
2、熒光標記的細胞因子抗體
R&D提供FITC、PE和APC標記的細胞因子抗體
3、溶血素
用外周全血檢測時需使用溶血素（R&D目錄號WL1000用于人或者WL2000用于小鼠；eBioscience目錄號00-4333）溶解紅細胞
4、激活劑
① Phorbol 12-Myristate 13 Acetate（PMA）（Alexis，目錄號ALX-445-004-M001）
DMSO中調(diào)節(jié)濃度0.1mg/mL
分裝（20L），－20℃儲存。勿反復凍融
每次實驗用無菌無疊氮鈉PBS 1：100稀釋儲存液
D.PMA終濃度25ng/mL細胞懸液
② Ionomycin （Alexis，目錄號ALX-450-006-M001）
于乙醇中配制成濃度0.5mg/mL
－20℃儲存
每次實驗用無菌無疊氮鈉PBS 1：10稀釋儲存液
③Ionomycin終濃度1g/mL細胞懸液
Staphylococcal enterotoxin B（SEB） （Sigma，Catalog No.S-4881）
無菌無疊氮鈉PBS調(diào)節(jié)濃度0.5mg/mL
4℃儲存
SEB終濃度10g/mL細胞懸液
④ CD3：包被在培養(yǎng)板中，在蛋白轉運抑制劑存在下活化未稀釋的血液細胞
⑤ CD28：加速不同刺激劑（包括SEB、CD3等）的活化效應，濃度一般為10ug/ml
5、阻斷劑
阻斷高爾基體介導的轉運作用，使得刺激細胞表達的細胞因子聚集在胞漿內(nèi)
① Brefeldin-A（BFA） （eBioscience，目錄號00-4506）
于DMSO中調(diào)節(jié)濃度5mg/mL
分裝（20L），-20℃儲存。勿反復凍融。
每次實驗用無菌無疊氮鈉PBS 1：10稀釋儲存液
激活最后4－5小時BFA終濃度10g/mL細胞懸液。
注意：BFA過度孵育會導致細胞活力下降
② Monensin （eBioscience，目錄號00-4505）
6、 不含谷氨酰胺的RPMI-1640
7、 固定劑
細胞在體外刺激后需要對細胞進行固定。固定的目的在于通過蛋白的交聯(lián)和變性一方面使細胞因子固定在細胞內(nèi)，另一方面避免細胞表面抗原丟失。含4%的多聚甲醛PBS溶液（eBioscience，目錄號00-8222）
8、 破膜劑
含1%皂甙、0.05%疊氮化鈉的Hanks溶液（HBBS）（eBioscience，目錄號00-8333）
將細胞膜穿孔，已利于熒光標記的細胞因子抗體進入細胞內(nèi)，于相應的細胞因子結合
9、其它試劑
無菌無疊氮鈉PBS，乙醇，含1%多聚甲醛的PBS，4℃儲存。
